咋样预防显微摄影错误和故障的故障排除

2021-08-13 09:53:28 admin 5

咋样预防显微摄影错误和故障的故障排除,人无完人,室人总会发生错误和失误的,在实验室中也会不小心的发生这样的事情。在自己努力的基础上尽力避免失误。但有时候总会难免的。因此我们来一起探讨吧。

显微摄影与任何形式的摄影一样,无论显微镜设备的复杂程度或显微摄影师的经验水平和技能如何,都容易出现各种故障和错误。必须仔细检查错误以确定来源,这通常是由于设备故障、样品制备不当、技术不当或处理错误造成的。使用下面的链接导航到我们关于显微摄影错误性质和建议补救措施的具体讨论。

问题 1:
明场曝光时间短于 1/2 秒,但显微照片的清晰背景呈现蓝色而不是白色。
解决方法: 对于胶片乳剂来说,光源色温可能太高了。这是彩色显微摄影最常见的错误之一。尝试使用柯达 81 系列 Wratten 滤镜之一来降低色温。如果蓝色背景非常微妙,低密度颜色补偿滤镜(CC10Y 至 CC20Y)可能足以纠正问题。
问题 2:
曝光时间短于 1/2 秒,但显微照片的清晰背景呈现黄色而不是白色。
解决方案:照明色温可能太低,这表明您可能正在使用带有钨丝光源的日光平衡彩色胶片。尝试使用柯达 82 系列 Wratten 滤镜之一来提高色温。如果背景色调非常微妙,柯达 Wratten 色彩补偿滤镜(10CCB 或 20CCB)可能足以去除偏黄。如果您使用的是日光平衡胶片,请确保安装了柯达 80A(或同等产品)色彩平衡滤镜。该滤镜的奥林巴斯等效物是LBD,尼康等效物是NCB
问题 3:
我使用的是室内/钨丝胶片,曝光时间低于 1/2 秒,但我的显微照片整体(背景和样本)非常蓝。
解决方法:光源色温很高,不适合胶片乳剂。确保您的光路中没有无意中使用 Olympus LBD 或 Kodak 80A 滤镜。如果是这样,请将其删除。
问题 4:
我使用的是户外/日光胶卷,曝光时间低于 1/2 秒,但是我的彩色显微照片整体非常黄(背景和样本)。
解决方法: 对于胶片乳剂,光源色温过低。确保在光路中使用 Olympus LBD、Nikon NCB 或 Kodak 80A 转换滤光片将色温提高到 5500 K。

问题 5:
我的曝光时间为几秒钟,结果显微照片显示整体偏色(洋红色、蓝色、黄色、绿色、青色或红色)。
解决方案:确保您已为正在使用的胶片设置了互易设置,并在光路中尝试使用 Kodak Wratten CC 滤镜之一(补充不需要的偏色)。请参阅图 1 中所示的颜色补偿三角形,以选择补偿滤光片的正确颜色。要使用颜色三角形,请按照从顶点到相反侧或从一侧到相反顶点的箭头。一旦确定了补偿滤光片颜色,就必须通过测试曝光来近似适当的密度。例如,通过使用 CC 品红色滤光片去除绿色色偏,滤光片的密度取决于绿色色偏的强度。同样,可以使用 CC 蓝色滤镜来校正导致黄色高光和阴影的色彩平衡错误。

问题 6:
我的图像质量看起来不错,但是显微照片的角落有暗角。
解决方案:这可能是由于未能充分打开视场光阑(位于显微镜底部的光端口处)以清除取景器目镜或聚焦望远镜中所示的胶片框轮廓的结果。确保在设置 Köhler 照明时,视场光阑已经聚焦在已经聚焦的样本上,居中,并在胶片框架的轮廓之外打开。不要使用放大倍数小于 2.0 的照相目镜,因为它们是用于视频成像,而不是用于胶片相机的显微摄影。还要检查台下聚光器孔径光阑,以确保其打开的值介于物镜后孔径直径的 65% 和 80% 之间。
问题 7:
虽然我的曝光和色彩保真度看起来不错,但显微照片显示从一侧到另一侧的强度不均匀。
解决方案:这可能是由于聚光镜的视场光阑和/或孔径可变光阑偏离中心造成的。原因也可能是灯的灯丝没有以显微镜的光轴为中心。重复建立科勒照明的过程,仔细监测灯丝、视场光阑和聚光器孔径开口的位置。另外,取出一个目镜,向下看管子,看看灯丝是否在物镜后透镜的中心,聚光镜的孔径光阑是否出现在打开和关闭时向后的中心物镜的镜头。如果显微镜使用靠近灯的磨砂过滤器,请确保将其正确插入光路中。一些显微镜使用预先居中的卤钨灯泡,
问题 8:
我的曝光看起来不错,颜色看起来也不错,但是显微照片看起来很模糊。
解决方案:确保使用取景器目镜或带有十字准线的聚焦望远镜作为目标,这样您的眼睛就不会在通过显微镜观察时误以为自己处于对焦状态。如果您使用带有校正环的物镜,请将其设置为玻璃盖板的实际厚度(如果已知)。
问题 9:
使用 40x 和 100x 物镜的显微照片非常出色,但使用 10x 或 4x 物镜的显微照片经常失焦。
解决方案:这些低倍率、低数值孔径物镜的景深太大,焦深太小,您应该使用聚焦放大镜来确保在样品水平上准确对焦。
问题 10:
我的显微照片总体上看起来不错,但我没有足够清晰地看到标本的细节。
解决方案:您可能应该使用更高放大倍率、更高数值孔径的物镜。分辨率与物镜的数值孔径直接相关,放大倍数有助于将图像扩散到眼睛视网膜的更大区域。通常,在增加总放大倍数时,更希望使用更高倍率、更高数值孔径的物镜而不是更高倍率的目镜。
问题 11:
我的显微照片看起来不错,但在某些镜头中,外围区域失焦,而在其他镜头中,中心区域失焦。
解决方案:您的物镜可能会出现场曲光学像差,这是缺乏平场校正的旧物镜的常见问题。使用平面物镜,因为这些物镜是由显微镜制造商设计的,可提供视野中从边缘到边缘平坦的图像。
问题 12:
我的暗场照明显微照片严重过度曝光,样本看起来褪色,几乎没有高光细节。
解决方案:检查自动相机系统上的曝光调整,以确定 ISO 是否设置正确。使用曝光调整功能(如果可用)来减少曝光时间,或将单反相机的快门速度调整到较低的值。另一种方法是增加自动和手动相机背面的 ISO 设置。使用自动相机系统时,请使用点测光而不是平均模式来设置曝光时间。请记住将点测光罩放置在显微照片区域边界内视场中可见的样品最亮部分。
问题 13:
我喜欢使用彩色负片,因为我可以从本地照片处理器快速恢复照片,但是样本颜色与我在显微镜中看到的不同,并且背景看起来有奇怪的偏色。
解决方案:本地处理机器内置了自动色彩校正过滤器,但这些过滤器不适用于显微镜中使用的常见污渍。您有两种选择:使用正片透明胶片而不是彩色负片,或者安排向本地处理者展示颜色应该是什么样子,并让处理者同意手动操作或移除滤镜以获得所需的结果。
问题 14:
我几乎只处理用苏木精/伊红染料混合物染色的组织薄片。细胞核看起来正常,但粉红色的伊红染色看起来很苍白并被洗掉了。
解决方案:一些彩色胶片难以再现曙红染色的粉红色调。尝试在光路中使用 didymium 过滤器来增强曙红的粉红色。
问题 15:
我的大部分工作是使用日光胶片进行荧光显微镜检查,但由于曝光时间长,我无法正确曝光。
解决方案:如果您的相机具有荧光设置(Olympus PM-30 自动相机系统上的 Fl 或 SuperFl 模式;PM-20 上的 Fl),请确保使用它们。尝试对荧光区域进行点测光,作为额外的预防措施,以三分之一到二分之一的 f 级增量将您的照片包围在几个 f 级上。使用快速乳剂胶片(例如,用于黑白的 T-Max 400 或用于彩色透明胶片的 Fujichrome Provia 400)以减少曝光时间。此外,使用高数值孔径物镜和低倍率照片目镜在荧光显微镜中获得最佳效果。
问题 16:
我同时使用宝丽来 3 l/4" × 4 1/4" 和 4" × 5" 胶卷适配器,但我的显微照片都是黑色的,而且似乎没有曝光。怎么了?
解决方案:这些胶片包适配器有一个黑色的滑块,必须从光路中拉出;否则光线无法到达胶片进行曝光。检查以确保在胶片曝光期间取出深色幻灯片,然后在记录显微照片后重新插入。
问题 17:
如何查找特定电影的互惠设置信息?
解决方案:如果您使用的是 Olympus PM-20、PM-30 或 U-Photo 系统,则此信息内置于这些相机的内存中,可在胶片设置控件下找到。对于其他不太复杂的相机或最近生产的胶片,胶片制造商的数据表和/或显微镜制造商会建议更长曝光所需的额外曝光时间。这些数据表通常以便携式文档格式 (PDF) 出现在制造商的网站上。
问题 18:
我使用带有校正环的高数值孔径物镜,但显微照片显得模糊且缺乏对比度,并且显微镜通常难以对焦。
解决方案:如果正确调整校正环以匹配盖玻片厚度,请检查物镜前透镜是否没有污染油,这些油可能是在使用浸入式物镜后将物镜摆动通过油池时无意中获得的。还要检查以确保显微镜载玻片没有倒置。
问题 19:
我的显微照片具有出色的对比度和色彩饱和度,但胶片上有令人讨厌的失焦黑点。
解决方案:灰尘和碎屑是显微摄影中的常见问题。为了缓解这个问题,在检查目镜中的标本时,在载物台周围平移显微镜载玻片。如果黑点随载玻片移动,则用溶剂(乙醇、二甲苯或镜头清洁液)小心擦拭载玻片和盖玻片,然后将其放回显微镜载物台上。碎屑也可能积聚在靠近主共轭平面之一的透镜表面上。检查场透镜、聚光顶透镜、物镜前透镜、目镜和投影透镜,确保它们清洁无尘。旋转光路中的目镜和其他光学元件,以确定不需要的灰尘和碎屑污染的来源。
问题 20:
我的显微镜似乎对焦正确,目镜与投影镜头齐焦,但显微照片仍然显得模糊和失焦,尤其是当我使用长曝光时间时。
解决方案:问题可能是显微镜支架过度振动,或者来自中央供暖和空调装置的强气流。另一个需要检查的来源是载物台漂移,当载物台的重量引起显微镜聚焦架移动、降低载物台(和样品)并导致显微镜失去焦点时,就会出现这个问题。检查显微镜聚焦张紧机构(如果配备)并调整它以消除或减少漂移。带有松焦架的旧显微镜可能需要由合格的技术人员进行维修。
问题 21:
我的显微照片对焦良好,但精细的标本细节似乎丢失,整体图像对比度低。
解决方案:这通常表明台下聚光器孔径光阑打开得太宽。要纠正此问题,请取下一个目镜并将相位望远镜插入眼管或将伯特兰透镜插入光路。在观察物镜后焦平面的同时,调整光圈直到其直径介于物镜孔径的 65% 和 80% 之间。使用反射光显微镜时,调整视场光阑和孔径光阑以提高对比度。
问题 22:
我的一些显微照片有清晰聚焦的暗角和直边,但整体图像质量很好。
解决方案:问题可能是由于视场光阑的干扰。检查光圈是否充分打开以保持在视野之外,但关闭到减少不希望的眩光的程度。如果调整视场光阑不能解决问题,则可能是投影镜头造成的渐晕。检查投影镜头以确保其正确就位并且放大倍数足以完全填满胶片框架的对角线以避免渐晕。显微镜制造商通常提供从 0.5 倍到 7.5 倍的不同放大倍率的一系列投影镜头,其尺寸介于两者之间。
问题 23:
显微镜中的标本看起来很好,相机系统似乎工作正常,但是显微照片太暗了,我不确定胶片是否已经曝光。
解决方案:当胶片很暗或全黑时,有可能它没有曝光。这可能表明自动相机的进片机构存在严重问题或相机快门系统出现故障。如果整个胶卷未曝光,但在显微照相过程中相机似乎工作正常,请检查以确保相机正在接收来自显微镜的光线。还要检查收线轴以确保它工作正常并且胶片正确连接。许多自动曝光系统在接收到的光线不足时不允许对胶片进行曝光,但较旧的手动系统没有此安全功能。在只有一帧或几帧未曝光的胶卷中,检查相机以确保胶卷正常推进。
问题 24:
显微照片看起来很暗,虽然在高光区域有一些细节,但这些区域由于不需要的黄色和灰色偏色而变色,并且阴影是完全黑色的,具有无法辨认的特征。
解决方案:胶片可能没有接收到足够的光线来正确曝光乳剂。彩色透明胶片对曝光错误的容忍度不是很高,并且只能在正确曝光的半到一个光圈内产生可接受的结果。数字图像和彩色负片提供更大的曝光宽容度,但这些媒体也容易出现曝光不足错误。如果整个视场的平均样本亮度不均匀,具有自动曝光功能的显微镜相机系统可能会导致背景非常亮的样本曝光不足。使用点测光来缓解这个问题,或者如果电子相机测光被限制对太多的视场进行平均,请降低胶片速度设置以增加曝光时间。通过以三分之一到二分之一的 f-stop 增量包围曝光来校准新样本和胶片总是一个好主意。当相机测光系统被不均匀的样品照明混淆时,数码相机也容易出现曝光不足错误。
问题 25:
我的彩色透明胶片看起来很薄而且褪色了。此外,高光区域会严重损失图像细节。
解决方案:出现此错误的原因是胶片接收了太多光线,通常是由快门速度过慢或光照强度过大造成的。卤钨灯(12 伏和 50 或 100 瓦)应调整到 8.5 和 9.0 伏之间的设置,以获得最佳显微摄影色温和照明。如果整个胶卷曝光过度,则故障可能出在相机系统的曝光设置中。检查相机 ISO 指示器以确保它与胶卷速度匹配,并注意手动相机的快门速度。如果自动相机系统的最低设置快门速度对于照明量来说太长,则它们可能会过度曝光胶片。使用中性密度滤光片降低照明强度,并在使用新样品或胶片时进行测试以调整曝光设置。

显微镜是实验室中检验很有需要的产品,因此显微镜摄像系统也就应用很广泛了。因此显微镜相机就配置在显微镜上用多了,总会有故障或者失误吧。以上是显微镜摄像中较容易出现的问题,我们经过这次探讨,有木有收获呢?欢迎致电公司技术售后热线:021-51602084.