如何应用荧光显微镜和微分干涉(DIC)的组合观察与分析

2021-08-11 10:17:24 admin 7

       奥林巴斯荧光显微镜显微镜观察方式中尤其是对于透明物质比如细胞和病理切片的观察。加了染料后观察的标本更为荧光显微镜提供了更好的观察体验。但是显微镜的观察方式很多种,相差观察,微分干涉,明场,暗场等等。下面我们来谈谈使用相差和微分干涉对比 (DIC) 方法探索荧光显微镜与其他对比度增强技术的组合。

使用相差和微分干涉对比 (DIC) 方法探索荧光显微镜与其他对比度增强技术的组合。

为了尽量减少光漂白的影响,荧光显微镜可以与其他对荧光染料无破坏性的技术相结合,例如微分干涉对比 (DIC)、霍夫曼调制对比 (HMC)、透射暗场照明和相位对比。

这个想法是使用非破坏性对比度增强技术定位样品中感兴趣的特定区域,然后无需重新定位样品,将显微镜切换到荧光模式。这种类型的典型实验的结果如图 1 所示。图 1(a) 说明了使用微分干涉对比成像的大鼠视网膜视神经节组织薄切片。图 1(b) 中的显微照片显示了相同的视野,但这次使用荧光照明成像,细胞被荧光染料固蓝染色,这是一种重氮盐,专门染色髓鞘中的磷脂。图 1(c) 说明了结合使用的两种技术,以产生叠加在视网膜微分干涉对比图像上的荧光染色视神经节脂质组织的精美显微照片。该图像是用专门的萤石物镜记录的,该物镜旨在允许使用同一物镜同时观察荧光和微分干涉对比。

通常用于同时使用微分干涉对比 (DIC) 和荧光照明对标本进行成像的显微镜配置如图 2 所示。 DIC 是使用透射光进行的,该透射光由位于连接到显微镜底座的灯箱中的卤钨灯提供。穿过视场光阑的光被镜子反射到台下聚光器并通过位于聚光器前焦平面的沃拉斯顿棱镜。

样品衍射的光首先通过位于物镜后焦平面附近的第二个沃拉斯顿棱镜,然后在中间图像平面上与穿过样品的未衍射光发生干涉。同时,汞灯发出的紫外线通过激发滤光片,然后由分色镜从上方反射到样品上。附着在染色样本上的发色团发出的二次荧光被物镜捕获并通过屏障过滤器进入目镜和/或光电管。此配置可用于单独或组合使用技术(荧光和微分干涉对比)对样本进行成像。

             微分干涉显微镜显微镜观察中比较常见的一种观察体验,让物体看起来更有立体感。和相差显微镜的观察方式也是一种很好地观察体验。